骨腫瘤免疫組織化學檢測

中華骨科雜志 2000年第0期第20卷 骨腫瘤

作者：丘钜世　李揚　王連唐

單位：中山醫科大學病理教研室　廣州，510080

　　腫瘤的抗原性與腫瘤的組織來源及組織分化有密切的聯系 。原發性骨腫瘤多來源于間胚葉組織，有着共同的抗原決定簇 ，如中間絲蛋白Vimentin,可籍與其它組織(上皮組織、神經組織 、肌肉組織等）來源的腫瘤相區别。但随着腫瘤組織分化表型 的不同，又出現了各種各樣具有相對特異性的抗原。因此使 用相應的抗體去識别不同分化表型的腫瘤，在骨腫瘤的分類、 診斷及鑒别診斷上具有一定價值。

　　按照骨腫瘤分化表型不同，可分爲以下八類。

　　一、成骨性腫瘤

　　腫瘤細胞主要向成骨細胞分化，産生骨基質，具有直接形 成骨質或類骨質的特性。在骨基質中主要爲Ⅰ型膠原蛋白(TypeⅠcollagen)，此外還有與骨質鈣化有關的非膠原基質蛋白，包 括骨鈣素(osteocalcin)、骨粘連蛋白(osteonectin)[1]、骨橋蛋白（osteopontin）、骨形态形成蛋白（BMP）及堿性磷酸酶等。這些物質 均可作爲骨組織的标志物。但在病理實際工作中，真正應用 上述标志去識别成骨性腫瘤的機會并不多，因爲明顯的骨質或 類骨質的形成，一般的HE染色便可清楚顯示，無需應用組織化 學或免疫組化染色去識别，隻是成骨不明顯的腫瘤，如成骨 不多的圓形細胞骨肉瘤或成骨不明顯的纖維母細胞爲主型或軟 骨母細胞爲主型的骨肉瘤，可運用上述标志物對腫瘤細胞的 成骨傾向加以确定。相反，在成骨性腫瘤中，良性與惡性的區 分，倒是病理醫生經常遇到的難題。我們認爲除了結合臨床 和X線表現，仔細觀察瘤細胞的異型性，計算其核分裂相外， 運用免疫組化方法檢測某些癌基因或抑癌基因的蛋白表達具有 一定意義。如幾乎所有的惡性腫瘤均有抑癌基因p53的改變，p 53蛋白陽性率在骨肉瘤中可高達58％～72％[2，3]，而在良性骨 腫瘤則全爲陰性；在骨肉瘤中Rb基因的缺失率達43％～67％[4－6]，而良性腫瘤多爲陽性(陽性率爲83.3％～100％)[4，7]；癌基因 bcl－2的蛋白表達僅見于惡性腫瘤而不見于良性者[8]。這些結 果豐富了免疫組化的内容。相信随着分子生物學在骨腫瘤研究 中的應用，還可以繼續發現新的基因蛋白的改變，若能加以 總結及規範化，可以作爲區别骨腫瘤良性與惡性的标志。

　　二、軟骨性腫瘤

　　腫瘤細胞具有向軟骨細胞分化，産生軟骨基質，形成軟骨 的特性。軟骨基質中的纖維成分主要爲Ⅱ型膠原，較纖細， 均勻分布于基質中。其非膠原成分主要爲軟骨粘蛋白（糖蛋白 ），主要含硫酸軟骨素，對胺藍染料呈異染性；又因爲 是糖蛋白，PAS染色陽性反應。在免疫組化染色中，軟骨細胞S －100蛋白及溶菌酶Lysozyme出現陽性反應，可作爲軟骨性腫瘤的 标志物。軟骨性腫瘤也與成骨性腫瘤一樣，明顯的軟骨形成是 很容易被識别的，不一定要用免疫組化去證明。而軟骨性腫 瘤中良性與惡性的界定，有時卻是很不容易的事，當然細胞的 異型性及其形态計量是重要的區分标志。我們認爲随着分子 生物學的發展，某些癌基因蛋白的免疫組化結果具有參考價值 ，如c－erbB－2基因蛋白産物在軟骨肉瘤中爲90％，而在良性軟 骨瘤中僅爲11％，正常軟骨中陰性。可見，該癌基因蛋白在軟 骨性腫瘤的診斷中，具有重要意義[9]。

　　三、骨巨細胞瘤

　　是由梭形或卵圓形的基質細胞與多量散布均勻的多核巨細 胞所組成。其具體組織來源有争議，隻能認爲是來源于多分化 潛能的間充質細胞。免疫組化表現複雜多樣：部分單核基質 細胞呈現纖維母細胞樣，隻對Vimentin呈陽性反應，而多核巨細 胞則呈陰性反應；部分基質細胞呈單核巨噬細胞樣，對M718(CD6 8)、AACT、Lysozyme、HLA－DR呈陽性反應，而多核巨細胞對單核巨 噬細胞類抗體中的M718(CD68)、AACT呈陽性反應，而對Lysozyme及HLA －DR則呈陰性反應。此外還有散在的基質細胞(很可能是langerha ns細胞)對S－100蛋白呈陽性反應等。若經過多代培養後，可以 見到多核巨細胞消失，而隻剩下對Vimentin呈陽性的纖維母細胞 樣單核基質細胞。近期研究表明抑癌基因p53蛋白陽性表達的骨 巨細胞瘤具有高度肺轉移和術後複發傾向[10]。

　　四、骨髓性腫瘤(小圓細胞腫瘤)

　　包括Ewing肉瘤、原始神經外胚葉腫瘤、惡性淋巴瘤和骨髓 瘤等。

　　(一)Ewing肉瘤:有關其組織發生，一直都有争論，Ewing最初(1 921年)稱之爲“彌漫性内皮瘤”(diffuse endothelioma)，主要考慮此 瘤源自血管内皮細胞。但其細胞形态及免疫組化FⅧ陰性都不 支持内皮細胞來源之說。後因其免疫組化表現間葉組織共有的 标志Vimentin陽性，瘤細胞能産生少量的Ⅰ型、Ⅲ型及Ⅳ型膠 原，漿内富含糖原，堿性磷酸酶陽性，低分子量的cytokeratin弱 陽性，S－100蛋白反應弱陽性等而考慮其來自骨髓的多潛能未 分化間充質細胞；最近根據部分細胞出現菊形團或假菊形團排 列并呈現神經元和神經纖維的标志陽性，因而認爲該瘤屬骨 及軟組織的原始神經外胚葉腫瘤(primitive neuroectodermal tumor,PNET) 的一簇，而稱之爲Ewing肉瘤/PNET[11]。我們認爲在未有足夠證據 證實所有Ewing肉瘤均具有上述神經源性标志之前，隻将細胞形 态及免疫組化表現爲明顯的神經組織分化者，獨立爲骨及軟組 織的PNET外，大部分無明顯神經組織分化特征的病例仍稱之爲 Ewing肉瘤爲好。

　　(二)原始神經外胚葉腫瘤(PNET):如上述骨和軟組織的PNET在細 胞形态上應是小圓形細胞惡性腫瘤出現較明顯的菊形團排列或見有 少量大細胞向神經元細胞分化，而在免疫組化方面，神經組 織标志包括NSE、NF、Leu7及低分子量Keratin等有較明顯陽性反應 者稱之謂骨和軟骨組織的PNET。

　　(三)惡性淋巴瘤:骨原發性惡性淋巴瘤與骨外淋巴組織發生 的淋巴瘤一樣，可分爲何傑金淋巴瘤(HL)及非何傑金淋巴瘤(NHL )，骨内的HL少見，而多爲NHL。其免疫組化反應與骨外淋巴瘤相 同，如白細胞共同抗原(LCA)呈陽性反應；B細胞淋巴瘤對L26(CD2 0Cy)、HM57(CD79)等呈陽性反應；T細胞淋巴瘤對UCHL1（CD45R）、VCHT1（CD3）等呈陽性反應；組織細胞淋巴瘤對Mac387、Lysozyme呈陽 性反應；而間變性淋巴瘤及HL的R－S細胞對BerH2(CD30)及CD23反應 呈陽性。随着免疫學研究進展，惡性淋巴瘤的分類及免疫組化 不斷更新，已形成了一套專門的免疫組化體系。

　　(四)骨髓瘤:常爲多發性故又稱爲多發性骨髓瘤，由成熟和 不成熟的漿細胞構成。當B細胞分化爲漿細胞時，細胞表面的I g(sIg)逐漸丢失，而細胞中央cIg含量增多，有IgM、IgG、IgA、IgD、Kappa、Lambda等出現。

　　五、其他結締組織的骨腫瘤

　　按其表型分化傾向而呈現該類組織的免疫組化特性如:

　　1.成纖維性腫瘤（成纖維性纖維瘤、纖維肉瘤等）:産生的 基質主要爲Ⅰ型及Ⅲ型膠原，對中間絲抗體Vimentin反應呈陽性。

　　2.組織細胞性腫瘤(良性及惡性纖維組織細胞瘤):除有成纖 維性腫瘤的抗原特性外，對組織細胞性抗體如Lysozyme、AACT、Ma c387呈陽性反應。

　　3.肌源性腫瘤:對肌肉特異的抗體如HHF35、actin等反應陽性， 橫紋肌則對myoglobin亦呈陽性反應。

　　4.脈管性腫瘤(血管和淋巴管):内皮細胞對FⅧ、CD31反應陽性 ，血管基底膜對Ⅳ型膠原抗體陽性，肌層或外皮細胞對肌源 性抗體(見上)反應呈陽性。

　　5.脂肪組織腫瘤:細胞除脂滴可通過蘇丹Ⅲ組化染色顯示外 ，S－100蛋白染色呈陽性反應。

　　六、其他腫瘤

　　1.神經鞘瘤及神經纖維瘤:對神經纖維（NF）及S－100蛋白染 色呈陽性反應。

　　2.脊索瘤:對S－100蛋白、角蛋白(Keratin)、上皮細胞膜抗原(E MA)均呈陽性反應。

　　3.長骨造釉細胞瘤：其上皮分化部分對上皮性抗體如Keratin 等呈陽性反應。向纖維母細胞分化部分對Vimentin呈陽性反應。

　　七、轉移瘤

　　多數爲癌轉移，包括肺癌、胃癌、肝癌、前列腺癌、乳腺 癌等，對上皮性抗體反應陽性；神經源性腫瘤(神經母細胞瘤 等)對神經元的中間絲NSE及S－100蛋白等反應陽性。

　　八、骨的瘤樣病變

　　需用免疫組化進行診斷或鑒别診斷:

　　1.嗜酸細胞肉芽腫(又稱langerians細胞肉芽腫）:langerhans細胞 對S－100蛋白反應陽性，在診斷及鑒别診斷上有較大意義。

　　2.骨皮質纖維性缺損和非骨化纖維瘤：主要由成纖維細胞 及組織細胞構成，故對Vimentin、Lysozyme、AACT、Mac387等呈陽性反應。

　　最後，骨組織及骨腫瘤的制片，常要通過強酸脫鈣過程， 這對某些抗原産生嚴重破壞，故有時出現抗原表達減弱或全部 喪失，出現假陰性表現時，應考慮改用緩和脫鈣的方法，盡 量減少在脫鈣過程中抗原的丢失。

　　參考文獻

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　　9，李甯,沈璐華,祝慶孚,等.C－erbB－2原癌基因産物在軟骨肉 瘤中的增強表達.中華病理學雜志,1994,23:37－39.

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