胰腺癌的基因診斷研究現狀

       檢測方法主要有：①DNA測序法；②PCR-SSCP法，此法的敏感性及特異性均在90%左右；③免疫組化法，此法的敏感性爲75%，陽性預測值爲 63%。由于p53基因存在于人類多種腫瘤中，而且p53基因在5、6、7、8及其他外顯子均可能發生突變，臨床上用分子生物學技術檢測這些突變既耗時又耗力，故大多數人主張用免疫組化法檢測p53基因産物——p53蛋白。正常細胞的p53蛋白半衰期極短，表達水平低而檢測不到，當p53基因突變時，其蛋白産物在核内堆積，p53呈高表達，即陽性發現。Barton等檢測了22例胰腺癌标本，有13例（60%）p53蛋白陽性，Digiuseppe等檢出 40%的胰腺癌組織有p53蛋白的過度表達，因此認爲，p53基因的改變在胰腺癌發生中有重要作用。

　　p53基因突變存在于多種腫瘤中，且在胰腺癌中的突變率遠低于K-ras，某些良性胰腺病也可出現陽性，故作爲基因标志物單獨用于胰腺癌的診斷意義不大。Maacke等[13]報道，15例胰腺癌及27例胰腺炎病人的胰液中，p53蛋白陽性率分别爲67%及59%，兩者相差不顯著，認爲在慢性炎症過程中p53過度表達可能由于DNA損害所緻。正常及突變的p53蛋白釋放入血後，刺激B淋巴細胞産生抗p53蛋白的自身抗體。有人探讨了血中p53蛋白的自身抗體測定，結果發現，胰腺癌中陽性率爲18.2%，急性胰腺炎爲5.3%，慢性胰腺炎中爲12.1%，三者之間差異不顯著。

　　一些研究表明，p53蛋白的過度表達似乎與胰腺癌預後有關，但遺憾的是，報道的結論不一緻。多數學者的研究結果爲：p53蛋白陽性的胰腺癌病人預後較差，生存期短。有人觀察到p53蛋白陽性的胰腺癌病人生存期隻有10個月，而陰性者爲20個月，Linder[14]等的報道也支持這個結論，但 Dergham[15]發現p53蛋白陽性的胰腺癌病人的生存期(12.8個月)較陰性者長（10.5個月），各家報道結果矛盾的原因有待于進一步探讨。

　　3 端粒酶

　　端粒是真核生物線性染色體末端的一種特殊結構，由簡單重複且富含鳥嘌呤的DNA序列及相關蛋白組成。人和各種脊椎動物的端粒DNA序列都爲（5’-TTAGGG-3’）n，近來研究表明，它與細胞的壽命控制有着密切聯系。端粒長度的維持需要端粒酶的激活，端粒酶是含RNA模闆的核糖核蛋白，以自身RNA爲模闆合成端粒重複序列。含有這種活性酶的細胞可逃避進行性端粒縮短而獲得無限制的生長潛力。在大部分正常人體細胞中沒有端粒酶的活力，而在腫瘤細胞中端粒酶卻特異性表達。

　　1994年，Counler等發現端粒酶活力僅存在于腹水轉移卵巢癌中，而在正常卵巢上皮組織中缺乏，開始認識到端粒酶在腫瘤發生發展中的重要性，以後人們逐漸發現，94%神經母細胞瘤、93%乳癌、80%肺癌、85%肝癌、100%卵巢癌、85%胃癌、84%前列腺癌和75%腎癌中端粒酶陽性，而在鄰近正常人體組織細胞或良性腫瘤組織中則多爲陰性。Hiyama等[16]測定了胰腺癌手術切除标本後再行胰管刷檢物中的端粒酶活性，發現9例胰腺癌均陽性，而3例囊腺瘤及1例慢性胰腺炎均陰性。由此看出，檢測端粒酶活性診斷胰腺癌有100%的敏感性及特異性。推測如能在内鏡下取材進行端粒酶的測定，此方法将是診斷胰腺癌的又一新途徑。

　　4 聯合檢測

　　爲提高胰腺癌診斷的敏感性和特異性，有人嘗試同時檢測兩種或多種癌相關基因。最常見的組合是以K-ras爲主，再輔以其他基因。Dergham 等[15]在76例胰腺癌的病理标本中，同時檢測K-ras突變及p53蛋白表達，結果單有K-ras突變率爲72%，單有p53表達率爲43%，兩者都陽性者爲31%，至少有一種陽性者爲84%，表明同時檢測可提高陽性率。他們還發現兩種突變同時存在與單獨存在相比，在腫瘤分級、分期、存活期上均無明顯差别。Surgio等[17]在115個正常、未侵襲病竈、已侵襲病竈中同時觀察K-ras突變及5q、18q染色體雜合性丢失（LOH），發現K- ras突變發生于胰腺癌發病的早期，突變部位是多竈性的，這爲用于臨床早期診斷提供了依據。5q、18q染色體LOH則是胰腺癌相對晚期的現象，其中5q 染色體是APC基因所在區域，18q染色體則是DCC及DPC4基因所在區域。

　　5 dPC4基因

　　dPC4（deleted in pancreatic cancer 4）基因是近年來新發現的一種新的腫瘤抑制基因，編碼蛋白是TGF-β傳遞信号到細胞内途徑的一個成員，而TGF-β則抑制許多細胞的生長，所以DPC4 的丢失可促使細胞過度生長[18]。新近研究發現，P21wafl可能參與這個過程的發生[19]。1996年，Hahn[20]報道，在18q21、1 上發現DPC4基因，并測得約50%的胰腺癌有DPC4的丢失或失活，其中約30%爲純合性丢失，約20%有點突變，認爲DPC4基因的改變可能與胰腺癌的發生有關。DPC4基因改變在膀胱癌、乳腺癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、卵巢癌及神經系腫瘤發生率較低，而在食道癌、胃癌及與潰瘍性結腸炎有關的腫瘤中未發現DPC4的改變[21]。因此，DPC4基因的丢失或失活有望成爲胰腺癌的新基因标志物。

　　6 其他

　　與胰腺癌發生有關的基因還有APC、DDC、Rb-1、C-erbB2、nm23等，因這些基因在胰腺癌中的表達率遠不如K-ras高，故不能單獨作爲胰腺癌基因用于診斷。