分辨你體内病毒的标簽

　　臨床工作中發現少部分經酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測僅乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和抗-HBc IgG陽性的患者，病毒含量卻很高。爲此，采用時間分辨免疫熒光分析法(TRF)對34例此類患者進行乙型肝炎标志物(HBV M)的檢查，現将結果報道如下。

　　一、資料與方法

　　1. 病例選擇：爲2002年2月至9月住院或門診患者，共34例，男21例，女13例，年齡5～58歲，平均(29.2±18.7)歲。采靜脈血分離血清，用ELISA進行HBV标志物(HBV M)檢測及HBV DNA定量檢查。留取血清置-30℃保存。(1)HBsAg、抗-HBc IgG陽性，乙型肝炎e抗原(HBeAg)、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc IgM陰性;(2)HBV DNA含量>104拷貝/ml;(3)近3個月未使用抗病毒藥物。每人進行2次抗原抗體檢查，結果一緻。2次HBV DNA檢查，結果相差1個數量級以下。

　　2. 常規HBV M檢測：用ELISA法，試劑爲上海科華生物工程股份有限公司産品，按産品說明書操作。

　　3. HBV DNA含量測定：采用實時熒光定量PCR法，試劑盒購自廣州中山醫科大學達安基因診斷中心。儀器爲美國Perkin Elmer公司GeneAmp甈E5700型PCR儀。嚴格按說明書操作，檢測靈敏度爲103拷貝/ml。

　　4. TRF法檢查HBV M：試劑爲上海新波生物技術有限公司産品，采用Anytest2000時間分辨檢測儀。嚴格按照産品說明書操作。

　　5. 統計分析：取HBV DNA含量的對數值進行成組設計的兩樣本均數比較，行t檢驗。

　　二、結果

　　1.HBV M：用TRF法檢查發現，34例患者中HBsAg、HBeAg、抗-HBc均陽性者15例，HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均陽性者14例，僅HBsAg、抗-HBc陽性者5例。即用ELISA檢查時HBeAg假陰性15例，抗-HBe假陰性14例(表1)。

　　表1 時間分辨免疫熒光發析法檢測乙型肝炎标志物結果(x-±s)

　　乙型肝炎标志物 參考值 樣本數 濃度 陽性例數 陽性率(%)

　　乙型肝炎表面抗原 0～0.5ng/ml 34 279.19±61.62 34 100.0

　　乙型肝炎表面抗體 0～10mU/ml 34 2.21± 5.60 0 0

　　乙型肝炎e抗原 0～0.03Ncu/ml 34 0.15± 0.13 15 44.1

　　乙型肝炎e抗體 0～1.5Ncu/ml 34 2.86± 1.29 14 41.2

　　乙型肝炎c抗體 0～0.1Ncu/ml 34 11.83± 4.79 34 100.0

　　2.HBV DNA含量：HBeAg及抗-HBc均陰性組、HBeAg陽性組、抗-HBc陽性組HBV DNA含量的對數平均值分别爲6.45±1.74、7.29±1.59、5.80±1.46。将前者與後兩組分别進行成組設計的兩樣本均數比較的t檢驗，t值分别爲1.005、0.816，P值均>0.05，差異無顯著性。

　　三、讨論

　　HBV M的變化是評估HBV感染後病情轉歸的重要依據，也是抗病毒治療的療效考核指标之一。通過TRF檢查發現，大部分ELISA法檢測爲HBsAg、抗-HBc陽性模式的患者其實爲HBeAg假陰性(15/34，44.12%)及抗-HBe假陰性(14/34，41.18%)。僅少部分可能爲病毒變異的結果。研究發現，HBsAg、抗-HBc濃度顯著高于正常，ELISA及TRF符合率爲100%，抗-HBs濃度明顯低于正常，兩者符合率爲100%。而HBeAg、抗-HBe濃度僅稍高于正常，因此ELISA易出現假陰性。目前TRF主要用于激素的檢測。随着儀器及試劑的國産化，檢測費用的降低，TRF因其突出的高敏感性、特異性強、無放射污染等特點，在HBV M的檢測中有着廣泛的應用前景。