腸道病毒所緻各系統感染實驗檢查

      【實驗檢查】

　　（一）周圍血象 白細胞計數大多正常，在某些腸道病毒感染時可增高，中性粒細胞也可增多。

　　（二）病毒分離 一般都采取咽拭及糞便作病毒分離和檢定，尚可從病人的腦脊液、胸水、心包積液、血液、疱漿以及活檢或屍檢取得的組織中分離到病毒。标本取得後，應立即送檢。可接種于猴腎、人胚腎、人羊膜、人二倍體或Hela細胞、KB傳代細胞中進行組織培養，觀察細胞病變。同時用多種組織培養細胞進行分離可提高陽性率。陽性标本再以特異型的免疫血清作中和試驗進行型别鑒定。疑有柯薩奇A組病毒感染者，應将标本經皮下、腹腔内或腦内途徑接種乳鼠進行病毒分離，因其組織培養陽性率不高。柯薩奇B組病毒亦可使乳鼠緻病。

　　（三）血清免疫學試驗 采取雙份血清，測定型特異抗體水平。一般可用中和試驗、補體結合試驗、酶聯免疫吸附試驗（ELISA，酶标法）、放射免疫等法進行測定，其中以中和試驗最爲可靠，中和抗體消 失最慢，型特異性也較強。如恢複期抗體水平比早期有≥4倍上升，則有極大的診斷意義。但因腸道病毒型别衆多，血清學中和試驗工作量大，隻有當某地一已知型腸道病毒流行時，以此法進行診斷比較理想。

　　（四）免疫熒光快速診斷法 以熒光染色的免疫抗體來鑒定抗原可達到快速診斷的目的。但目前除在脊髓灰質炎病毒感染時應用外，在腸道病毒感染時采用不多，因需備各種型特異的免疫血清，手續繁多。最近采用許多血清型共有的VP3-ZC抗原和一種與多血清型的VP1衣殼蛋白交叉反應的單克隆抗體，改進了免疫診斷方法，但目前仍停留于研究階段。

　　（五）核酸雜交法 由于不同血清型的腸道病毒基因組間存在同源性，特别是5′端非編碼區部分區域高度保守，故可供核酸雜交，使近年來對腸道病毒鑒定有了新的飛躍。采用探針有以下三種：①cDNA探針，以病毒RNA某一片段爲模闆，由逆轉錄酶催化産生，大多克隆在質粒載體中，再把帶有顯色基因（生物素或地高辛）或同位素的核苷酸摻入到新合成的cDNA鏈中去，加以标記，若将标本先經12～24小時組織培養可提高陽性率。②RNA探針-由于RNA是單鏈分子，故它與靶序列的雜交反應效率極高，一般用特異的轉錄載體克隆腸道病毒RNA探針，混合幾種RNA探針可使檢測病毒型更廣，RNA探針在特異性和敏感性方面都優于cDNA探針。③寡核苷酸探針，較上述二種探針有下面優點。因其鏈短，與等量靶位點完全雜交時間短，且可識别靶序列内一個堿基的變化，可檢測點突變，又可大量合成，價廉。此探針因選擇5′端非編碼區共同序列，故可牢固而特異地同大多數臨床常見腸道病毒結合。爲了克服标本中腸道病毒滴度太低的問題，近年采用PCR法将單一基因或短DNA序列放大，再與探針雜交，此法已應用于臨床。在腸道病毒中樞神經系統感染流行時，從腦脊液中檢測腸道病毒RNA，陽性率高，可在24小時内得結果，比病毒培養平均需6～8天快得多。臨床标本用PCR擴增後，再與非同位素标記腸道病毒探針雜交，數小時即有結果，大大有助于臨床确診。