細細分辨乙肝病毒标志物

　　臨床工作中發現少部分經酶聯免疫吸附法(elisa)檢測僅乙型肝炎表面抗原(hbsag)和抗-hbc igg陽性的患者，病毒含量卻很高。爲此，采用時間分辨免疫熒光分析法(trf)對34例此類患者進行乙型肝炎标志物(hbv m)的檢查，現将結果報道如下。

　　一、資料與方法

　　1. 病例選擇：爲2002年2月至9月住院或門診患者，共34例，男21例，女13例，年齡5～58歲，平均(29.2±18.7)歲。采靜脈血分離血清，用elisa進行hbv标志物(hbv m)檢測及hbv dna定量檢查。留取血清置-30℃保存。(1)hbsag、抗-hbc igg陽性，乙型肝炎e抗原(hbeag)、抗-hbs、抗-hbe、抗-hbc igm陰性;(2)hbv dna含量>104拷貝/ml;(3)近3個月未使用抗病毒藥物。每人進行2次抗原抗體檢查，結果一緻。2次hbv dna檢查，結果相差1個數量級以下。

　　2. 常規hbv m檢測：用elisa法，試劑爲上海科華生物工程股份有限公司産品，按産品說明書操作。

　　3. hbv dna含量測定：采用實時熒光定量pcr法，試劑盒購自廣州中山醫科大學達安基因診斷中心。儀器爲美國perkin elmer公司geneamp甈e5700型pcr儀。嚴格按說明書操作，檢測靈敏度爲103拷貝/ml。

　　4. trf法檢查hbv m：試劑爲上海新波生物技術有限公司産品，采用anytest2000時間分辨檢測儀。嚴格按照産品說明書操作。

　　5. 統計分析：取hbv dna含量的對數值進行成組設計的兩樣本均數比較，行t檢驗。

　　二、結果

　　1.hbv m：用trf法檢查發現，34例患者中hbsag、hbeag、抗-hbc均陽性者15例，hbsag、抗-hbe、抗-hbc均陽性者14例，僅hbsag、抗-hbc陽性者5例。即用elisa檢查時hbeag假陰性15例，抗-hbe假陰性14例(表1)。

　　表1 時間分辨免疫熒光發析法檢測乙型肝炎标志物結果(x-±s)

　　乙型肝炎标志物 參考值 樣本數 濃度 陽性例數 陽性率(%)

　　乙型肝炎表面抗原 0～0.5ng/ml 34 279.19±61.62 34 100.0

　　乙型肝炎表面抗體 0～10mu/ml 34 2.21± 5.60 0 0

　　乙型肝炎e抗原 0～0.03ncu/ml 34 0.15± 0.13 15 44.1

　　乙型肝炎e抗體 0～1.5ncu/ml 34 2.86± 1.29 14 41.2

　　乙型肝炎c抗體 0～0.1ncu/ml 34 11.83± 4.79 34 100.0

　　2.hbv dna含量：hbeag及抗-hbc均陰性組、hbeag陽性組、抗-hbc陽性組hbv dna含量的對數平均值分别爲6.45±1.74、7.29±1.59、5.80±1.46。将前者與後兩組分别進行成組設計的兩樣本均數比較的t檢驗，t值分别爲1.005、0.816，p值均>0.05，差異無顯著性。

　　三、讨論

　　hbv m的變化是評估hbv感染後病情轉歸的重要依據，也是抗病毒治療的療效考核指标之一。通過trf檢查發現，大部分elisa法檢測爲hbsag、抗-hbc陽性模式的患者其實爲hbeag假陰性(15/34，44.12%)及抗-hbe假陰性(14/34，41.18%)。僅少部分可能爲病毒變異的結果。研究發現，hbsag、抗-hbc濃度顯著高于正常，elisa及trf符合率爲100%，抗-hbs濃度明顯低于正常，兩者符合率爲100%。而hbeag、抗-hbe濃度僅稍高于正常，因此elisa易出現假陰性。目前trf主要用于激素的檢測。随着儀器及試劑的國産化，檢測費用的降低，trf因其突出的高敏感性、特異性強、無放射污染等特點，在hbv m的檢測中有着廣泛的應用前景。