MS-PCR法重新評估血管緊張素原基因M235T多态性與家庭性原發性高血壓的相關性

　　MS-PCR法重新評估血管緊張素原基因M235T多态性與家庭性原發性高血壓的相關性
 
　　南京醫科大學第一附屬醫院江蘇省人民醫院心研所心内科210029
 
　　耿茜 楊笛 張寄南 馬文珠
 
　　目的 應用MS PCR法檢測血管緊張素原(AgT)基因M235T多态性與家族性原發性高血壓的相關性，并與傳統的PCR RFLP法進行比較。
 
　　方法 (1)采集外周血細胞提取基因組DNA，建立PCR RFLP最佳反應體系；利用3個引物建立MSPCR擴增體系；同一标本分别以兩種方法對比。(2)具高血壓家族史者94例，無家族史者36例，2組中血壓正常者和高血壓患者分别是62、32、26、10例，所有标本采用MS　　　　PCR法擴增。
 
　　結果 (1)PCRRFLP最佳實驗條件爲0.075靏基因組DNA擴增的PCR産物/30Unit.Tth111 I酶，擴增産物長度爲163bp,如存在變異位點則可被Tth111 I酶切成長度爲140bp的條帶。(2)應用MSPCR法檢測AgT基因型，如爲M等位基因純合型(235MM)電泳示一條156bp的擴增片斷；T等位基因純合型(235TT)則示一134bp條帶；M235T雜合型(235MT)則同時具有156bp和134bp兩條片斷。(3)10個标本分别以MSPCR和PCRRFLP法檢測，内切酶消化者基因型均爲MT，而MS PCR法僅1例爲MT型，餘9例均爲TT型(90%)，DNA測序結果證實爲TT型。(4)具有高血壓家族史的原發性高血壓患者組(FH組)、具家族史的非高血壓者(FNH組)、無家族史的正常對照組(N組)和無家族史的高血壓患者組(NFH組)AgT基因TT型頻率分别爲0.581、0.563、0.346和0.4，T等位基因頻率分别爲0.766、0.7656、0.577和0.55。