胃癌與免疫-抗體導向治療

    本世紀初Ehrilich曾提出用抗體導向治療腫瘤的設想，并稱之爲魔彈。近一個世紀來，人們不斷努力，反複實驗，但這一設想一直沒有很發實現。自1976年單克隆抗體技術問世以來，人們又燃起了應用魔彈治療腫瘤的希望，理由是抗腫瘤單克隆抗體更加特異，抗原決定簇明确，可以大量生産，可能更适合于導向治療。進入八十年代，我國就有許多實驗室 進行胃癌單克隆抗體的制備工作，是很艱苦的工作，不一定能堅持下來。但是有些實驗室從胃癌單克隆抗體的制備，到最後用于臨床診斷和治療，通過不斷努力，做出了很好的成績。若要實現腫瘤的導向治療，而且卓有成效，必須經以下幾個關鍵步驟。

單克隆抗體的制備

    目前單克隆抗體的制備多采取細胞融合的方法。國内外産生胃癌單克隆抗體也是 采取 這個辦法。但要得到特異性好，效價高及親合力強的抗體，還必須采取許多措施。首先在選擇抗原上下功夫。樊代明、張學庸等所制備的MG系列胃癌單克隆抗體時，避免單純用細胞系，因爲細胞系經過長期培養總要丢掉某些抗原，而采用新鮮标本可以彌補這個問題。他們用手術切除的新鮮胃癌标本結合細胞系，原發病竈的細胞與轉移病竈的細胞并用，這樣容易得到不同的抗原決定簇的單克隆抗體，因而得到的MG系列有較多的類型。同時他們制備篩選了大量抗體，從幾十個雜交瘤細胞中精選出來幾株高效價，高親合力的，穩定分泌的細胞株，組成MG系列。

    第二個必要的措施是要選擇一種好的篩選抗體的方法。常用的篩選辦法是酶聯免疫吸附實驗（ELISA）及免疫組織化學的方法。從目前來看，以後者爲好，它的優點是組織切片中抗原成分很複雜，抗體與何種細胞成分反應，一旦了然，如胃癌單克隆抗體，隻應同胃癌細胞反應，若是其它細胞成分也反應，如果不是非特異染色，就是抗原成分交叉，即有共同抗原。可以将非特異染色和交叉反應的抗體丢掉，隻留下較特異的抗體，所以用免疫組化篩選的效果全面而徹底，得到的信息多。在免疫組織化學的方法中，以ABC法比較敏感，即使反應較弱的抗體也能顯示出來。免疫熒光間接法，用起來也很方便，但敏感性差一些，兩者都能節省時間。在篩選時還有一個問題城要注意，就是石蠟切片與冰凍切片枯一定情況下都要使用。篩選抗體時用石蠟切片，可以選出效價高，能在石蠟切片上染色的抗體。但是石蠟切片經過了酒精及二脂溶劑的處理，脂性抗原已經去掉，所以與脂溶性抗原有關的抗體不能篩選出來。在确定抗體與那些組織有交叉反應時，則必須用冰凍切片，因爲冰凍切片上，抗原未丢失，若無交叉反應，才是真正的沒有交叉，所以用石蠟切片檢測抗體有無與其它組織反應是不可靠的。

單克隆抗體的特異性

    單克隆抗體能在人體應用有效，必須有較高的特異性及親合力。

    首先必須與大多數胃癌标本切片中的胃癌細胞呈陽性反應。如能對其中多數細胞和各種類型的胃癌都起陽性反應則更好。MG系列的鼠鼠抗體對各種不同分化的胃癌陽性率爲67%~100%，PCI抗體對胃癌的結合力是比較強的。

    另一個檢測特異性的辦法是将抗體用核素标記後注入帶人胃癌的裸鼠中，觀察有關抗體是否向人腫瘤中濃集。如将胃癌的單抗MGb2結合131I後，給荷人胃癌裸鼠注射，則可在體外顯像。在注射後第7天時，瘤正常組織的放射比爲16.22，說明抗體可在胃癌中濃集16倍。同時可結合131I MGb抗體注入後，腫瘤生長慢，瘤組織中呈大片壞死，而空白對照，單純抗體的對照組腫瘤生長快，分裂相多而極少壞死。

    在體外也可将抗體交聯抗癌藥物，加入胃細胞的培養系統中，以觀察抗體結合藥物後比單純藥物或單純抗體有更強的導向殺傷作用。對殺傷的細胞的檢測，過去都用Cr51釋放，3HTdr 摻入等方法，現在多用噻唑蘭（MTT）的方法，此法不用核素，比較完全，準确度也不差。當然抗體在荷人腫瘤的裸鼠中能濃集，所以殺傷腫瘤作用也不明顯。因爲單克隆抗體由鼠産生，對鼠的組織不發生反應，隻對所帶人的腫瘤反應，所以這種濃集是順理成章的，但當人用時，各種人的組織難免在抗原性上與人的胃癌有交叉反應，所以濃集起來就困難得多。

    當然檢測單克隆抗體特異性的指标還有許多，如在免疫電鏡下看标記抗體是否能特異地與胃癌細胞超微結構結合或向細胞内轉移（内化）；還可以檢測抗體的親合力。

單克隆抗體人體内應用

    單克隆抗體的應用很多，如用它作免疫組織化學的試劑，進行病理診斷，用它裝備ELISA試劑盒進行胃癌血清學診斷等。這些在MG系列及其它系列的胃癌單克隆抗體都有所報道。但是這裏講的是如何把特異性好，在荷人腫瘤的裸鼠中能定位人的胃癌的抗體用于病人的診斷與治療。這種診斷與治療被稱爲導向診斷及導向治療。

    單克隆抗體用于人體前，必須進行一些檢查：①無熱源；②作急性毒試驗，如給小鼠尾靜脈注射時，不發生死亡或病變等。并經自願者受試，不出現不良反應，然後可申報衛生部批準進行臨床病人應用。達到國家生物制品鑒定部門的标準，經過在指定的醫院進行Ⅱ期，Ⅲ期臨床試驗後，方能批準在市場上出售。目前MG系列及PC系列均能 在病人身上用其核素标記的抗體進行顯像，作爲腫瘤的診斷，也可用來進行實驗治療，但尚未取得明确的療效報告。PC系列研制的産品在手術時可批示胃癌病竈或轉移病竈的部位，作爲手術導向。

人用鼠抗體存在的問題

    目前大部分單克隆抗體是鼠鼠細胞融合而成的，抗體本質上是鼠的免疫球蛋白。人用後，它可作爲抗原使人體産生抗鼠的抗體，人抗鼠抗體很快與注入的鼠抗體發生作用，使鼠抗體很快失效清除。而鼠抗體對人來說是異種蛋白，容易發生過敏，所以目前要用鼠抗體，必須将其 進行改造。一種辦法是由胃 蛋白酶消化鼠抗體使之成爲F（Ab）2，這樣保留其與抗原作用的可變區，去除容易誘發過敏及抗體産生的FC段，這樣一來，産生人抗鼠抗體的機會就少一些。

    目前大家都注意用基因工 程改造鼠抗體 的方法。因爲用人人雜交瘤 産生人的單克隆抗體十分困難。解決的辦法有兩個，一是從病人的淋巴細胞中單克隆抗腫瘤的抗體基因，表達的抗體就是人的抗體；另一辦法是對鼠抗體進行基因工程改造，例如可從鼠抗腫瘤單克隆抗體細胞系中提出其RNA，反轉錄成cNDA，用PCR擴增，克隆出其輕鏈及重鏈的可變基因，把這種基因在真核細胞或載體中表達出來的一種或可變區蛋白，即是一種抗腫瘤的小抗體，或者把這種小抗體的基因與人的FC段的基因聯接，組成一個嵌合基因，可變區仍是鼠的，恒定區是人的，将來表達一種嵌合抗體。也有把輕鏈可變區基因與重鏈可變區聯接一條單鏈的抗體，這三條抗體爲單鏈抗體、嵌合抗體、小抗體都可試用于臨床，看有無活性及診斷和治療效果。

    另外的辦法是将抗腫瘤抗體的輕重鏈可變區基因與另一個效應基因聯接，如把腫瘤壞死因子基因，CD8的基因或白細胞介素2-的基因與抗體基因聯接，試圖既發揮抗體的導向作用，又發揮使腫瘤發生壞死的腫瘤壞死因子的作用，這些改變是人們正在研究的，以達到鼠抗體人化目的的一些辦法