DNA含量與滑膜肉瘤預後關系

　　DNA含量分析技術是80年代以來迅速發展的一門新型檢測技術，已廣泛應用于腫瘤臨床及基礎理論的研究。其中流式細胞術(Flowcytometry,FCM)是一種快速定量分析細胞核DNA含量的技術，其在推測患者預後及治療反應上具有重要的價值[1]。滑膜肉瘤的組織結構複雜，目前尚無統一的分類及預後判定标準。研究表明，滑膜肉瘤患者的預後與其腫瘤細胞核的有絲分裂率有一明顯的相關性[2]，因此，我們拟應用FCM對其進行回顧性研究，探讨DNA含量在滑膜肉瘤患者預後判定中的作用。

　　1　材料與方法

　　1.1臨床資料

　　1.1.1資料選擇選擇1984年至1993年在我院進行診治的原發滑膜肉瘤52例，病例資料完整，術前均未進行化療及放療，行軟組織腫瘤擴大切除術，術後采用VAMC方案進行化療。其中男性30例，女性22例;**之比1.4:1，34例分布于 30～50歲之間，占本組資料的65.5%。

　　1.1.2腫瘤大小、局部浸潤及臨床分期52例腫瘤最大直徑21cm，最小直徑2cm，其中6例≤5cm，餘46例腫瘤直徑均>5cm。經病理證實6例局部骨侵襲，7例區域淋巴結轉移。根據軟組織肉瘤臨床分期标準進行臨床分期[3]，其中Ⅲa6例，Ⅲb33例，Ⅲc7例，Ⅳa6例。

　　1.1.3随訪本組資料平均随訪日期爲41個月，最長爲62個月，最短爲17個月。所有患者術前均經X線證實無1例肺轉移，治療後經X線證實肺轉移21例。

　　1.1.4病理分型對全部病理資料重新進行複查，根據腫瘤細胞有向上皮成分和梭形成分雙向分化的趨勢，将滑膜肉瘤分爲單相型及雙相型。

　　1.2滑膜肉瘤流式細胞分析及方法

　　1.2.1樣品來源确含腫瘤組織的石蠟包埋的組織塊在切片機上切取35μm厚組織片7片，經二脫蠟，梯度乙醇水化，胃蛋白酶消化，再以300目尼龍篩網濾去未消化的組織碎片，用75%的乙醇固定制備好的單細胞，4℃保存，備檢。

　　1.2.2制備好的單細胞懸液塗片，HE染色，顯微鏡下檢查腫瘤消化情況，了解單細胞懸液的産量。1.2.3應用溴化乙啶一步插入法進行染色，檢測前棄去待測樣品中的乙醇将細胞調整至1×104個/ml，在其内加入5%的雞紅細胞作對照與标本同步染色。

　　1.2.4用美國産FACS-420型流式細胞儀檢測樣品，波長488nm，功率爲300mW的氩離子爲激發光源，變異系數穩定在5%以内，每例标本測定1.5萬～2.5萬個細胞，平均爲2萬個。

　　1.3結果判定

　　1.3.1DNA指數(DNAIndex)表示DNA倍體水平DI=測定細胞(G0/G1峰均道值)/内标細胞(G0/G1峰均道值)×2.85

　　本實驗内标細胞爲雞紅細胞，測定二倍體的雞紅細胞DNA含量爲正常人淋巴細胞含量的35%，故乘常數2.85。依據DI值判定DNA倍體，本組資料以DI=0.9～1.10爲二倍體及近二倍體，其它爲異倍體。

　　1.3.2細胞周期細胞周期由計算機确定G0/G1期、S期、M/G2期三期細胞的道數範圍後，将落在各自道次上的細胞數疊加總合而得。增殖細胞指數PI=[(S+M/G2)/(G0/G1+M/G2+S)]×100%。

　　1.4統計學方法

　　所得數據均值比較用t檢驗，百分率比較用χ2檢驗，以P<0.05爲顯著水平。

　　2　結果

　　2.1滑膜肉瘤DNA含量

　　表1　單相型、雙相型滑膜肉瘤的DI期、S期、PI比較

　　              例數           DI值           異倍體比例   

         Ⅲa          6             1.08±0.04              50

　　Ⅲb        33             1.29±0.09              15.2

　　Ⅲc          7             1.60±0.08            100

　　Ⅳa          6             1.89±0.10            100

　　2.2DNA含量與滑膜肉瘤分期及病理類型的關系

　　52例滑膜肉瘤各期異倍體的比例分别爲Ⅲa50%、Ⅲb15.2%、Ⅲc100%及Ⅳa100%(表 2)，異倍體的出現機率并不随着腫瘤分期的進展而增加，但晚期滑膜肉瘤異倍體檢出率爲100%。52例滑膜肉瘤中單相型和雙相型分别爲33例和19例，單相型占本組資料63.4%，其中單相型滑膜肉瘤DI指數、S期道數及增殖細胞指數(PI)均較雙相型高(表2)，且二者差異顯著(P<0.05)，說明單相型腫瘤細胞具有更高的增殖率。

　　表2　52例滑膜肉瘤各期異倍體的比例及DI值

　　              單相型         雙相型         P值

　　DI        1.64±0.24     1.24±0.02       <0.05

　　S        27.69±3.1      14.46±1 .82      <0.05

　　PI      42.21±6.40　29.76±4.18　<0.05

　　3　讨論

　　80年代以來迅速發展起來的流式細胞技術已成爲判斷人類惡性腫瘤預後的标準，研究表明腫瘤細胞DNA倍體水平與腫瘤的分化、生長方式、淋巴轉移及腫瘤患者的預後密切相關，且惡性程度高的腫瘤DNA非整倍體的檢出率也高[4]。由于各家使用不同型号的流式細胞儀和不同的标準細胞，DNA組方圖差異甚大，以G0/G1峰的DI值更能說明細胞的DNA含量，同時便于數據的相互比較及處理[5]。

　　本組資料表明，單相型滑膜肉瘤在滑膜肉瘤占有較高的比例，且單相型滑膜肉瘤有較高的S期及M/G2期比例及較高的肺轉移率，預後較差。作者認爲對滑膜肉瘤患者應積極采取根治手術，術後配合應用S期特異物殺傷殘存的腫瘤幹細胞，防止腫瘤細胞繼續增殖及轉移，可望提高滑膜肉瘤的生存率。