J Clin Invest：揭示USP9X去泛素化ALDH1A3并維持GCSs的間充質特點

裏空母線粒體瘤（GBM）是最常見和破壞性的知覺惡性，其形态在于廣泛的内異質性。盡管近期在多方法上病患方面拿到了進展，但GBM患者的結果僅僅感郁悶。GBM包括一個線粒體亞群，稱爲GBM幹線粒體（GSCs），兼具自我系統升級活性和多向分立潛能以及起始并能。因此，要務探索針對GSC的新病患策略。并且，丙酮脫氫酶（ALDH）超家族構變爲19種酶，它們将内源和外源丙酮代謝變爲相應的羧酸。ALDH1A3是主要的ALDH同工酶，加入人體線粒體的各種生理過程。更多的證據聲稱，ALDH1A3在肝癌幹線粒體（CSCs）裏表現顯現出頗高活性，并影響這些線粒體内的各種生物化學形态。在GBM裏，已斷定ALDH1A3作爲維持數間充質（MES）GSC的自我系統升級和緻瘤性的極其重要底物。然而，MES GSCs裏ALDH1A3嗜睡的組态僅僅是神秘的。2019年4月8日，南京醫科大學第一第二醫院王慧博設計團隊等人在The Journal of Clinical Investigation上公開發表題爲“USP9X deubiquitinates ALDH1A3and maintains mesenchymal identity in glioblastoma stem cells”的文章，斷定USP9X是一種其實的DUB，可緩沖ALDH1A3多脯氨酸化和穩定化。并且，USP9X是預測ALDH1A3hi MES GSCs富集的極其重要底物，是MES GSCs自我系統升級和緻瘤性所必需的。同時還檢驗了USP9X抑制對患者來源的MES GSC異種超級任天堂假設的潛在治果。爲了确認ALDH1A3蛋白質是否被脯氨酸 - 酶活性體子系統（UPS）翻譯後壓制，研究變爲果工作人員首先采用放線菌酮（CHX）阻斷RNA從頭合變爲并HEK293T線粒體和正常人星狀裏空線粒體（NHAs）裏的ALDH1A3RNA素質。其實，ALDH1A3在CHX妥善處理的8小時内慢慢地脫水并大部分檢測不到。此外，用酶活性體抑制劑MG-132妥善處理線粒體導緻ALDH1A3蛋白質素質不同尋常增頗高。這些數據聲稱ALDH1A3通過UPS脫水。接下來，研究變爲果工作人員尋求鑒定督導ALDH1A3穩定化的潛在DUB，并采用基因表達HEK293T線粒體裏的98DUB的siGENOMERTF文庫進行RNAi擇優。該研究變爲果初始擇優鑒定了與ALDH1A3暗示方面的4個DUB（USP3，USP9X，USP22和OTUD1）。當這些DUB與HEK293線粒體裏的ALDH1A3共暗示時，斷定隻有USP9X必需與内源性ALDH1A3直接電磁力，從而暗示USP9X是壓制ALDH1A3穩定度的不同尋常候選物。爲了測試這一點，将Flag記号的WT USP9X或催化反應失活的特異性C1566A USP9X（在催化反應結構域的一個極其重要半胱氨酸裏攜帶點突變）轉染到HEK293T線粒體裏。 WT USP9X而非C1566A特異性的暗示以劑量依賴性方法增頗高ALDH1A3蛋白質素質，聲稱USP9X以依賴于其DUB活性的方法緩沖ALDH1A3。裏空母線粒體瘤（GBM）幹線粒體（GSC）的數間充質（MES）亞型代表癌線粒體亞群，其因其頗高度侵襲性和對常規化學療法的抗性而著稱。近期已提顯現出丙酮脫氫酶1A3（ALDH1A3）作爲維持GSC的MES形态的極其重要一般說來。然而，支持出現異常ALDH1A3暗示的組态僅僅毫無疑問。在該研究變爲果裏，研究變爲果工作人員斷定脯氨酸特異性酶活性9X（USP9X）是MES GSC裏ALDH1A3的其實去脯氨酸化酶。 USP9X與ALDH1A3電磁力，蛋白酶并穩定化。此外，研究變爲果%-FACS分選的USP9Xhi線粒體富集兼具頗高ALDH1A3活性和有效緻瘤并能的MES GSC。USP9X的損耗不同尋常減至ALDH1A3，導緻MES GSC的自我系統升級和緻瘤并能的喪失，這可以通過ALDH1A3的上皮細胞暗示得到太大以往的挽救。此外，研究變爲果工作人員還證明USP9X抑制劑WP1130正向ALDH1A3脫水并且在MES GSC衍生的原位異種超級任天堂假設裏顯示顯現出不同尋常的病患功效。另外，USP9X與惡性腫瘤人GBM樣品裏的ALDH1A3暗示強烈方面，并且對于兼具MES亞組的患者兼具病狀價值。總的來說，研究變爲果結果揭示了USP9X作爲ALDH1A3蛋白質穩定化的極其重要去脯氨酸化酶和GSC定向病患的潛在靶點。原始顯現出處：Zhengxin Chen，et al.USP9X deubiquitinates ALDH1A3 and maintains mesenchymal identity in glioblastoma stem cells.J Clin Invest.April 8， 2019