确診糖尿病腎病

　　糖尿病腎病（DN）是糖尿病（Diabetes Mellitus， DM）的嚴重并發症之一。随着糖尿病發病率的增加，DN患者日益增多，因其發病隐蔽，進展緩慢，如果任其發展，當臨床上出現持續性蛋白尿時，腎髒病變已不屬早期，腎髒已出現了不可逆的病變，再用藥物也無法逆轉。因此，早期發現糖尿病腎病有其十分重要的意義。現簡要介紹三種糖尿病腎病的早期實驗診斷方法。

　　一、尿微量白蛋白檢測

　　（一）方法：競争酶聯抑制法。

　　（二）實驗步聚：

　　1、用撲克制的抗菌素人白蛋白包被塑料闆。

　　2、加入不同濃度的标準抗原或待測樣品，37℃溫育30分鍾。

　　3、加入底物溶液和終止液，通過酶标儀比色，即可算出待測标本濃度。

　　（三）結論：

　　此法快速簡便，非常适合臨床常規使用。但是其缺點是DM患者中尿微量白蛋白的陽性率較低，在Ⅱ型糖尿病病人中，陽性率不足20%。

　　二、尿銅藍蛋白檢測

　　（一）方法：酶聯免疫吸附測定法。

　　（二）實驗步驟：

　　1、銅藍蛋白抗體包被，冰箱過夜。

　　2、加入不同濃度的标準抗原或待測樣品，37℃溫育1小時。

　　3、加入酶标銅藍蛋白抗體，37℃溫育1小時。4、加入底物溶液和終止液，在酶标儀上讀取A值，即可算出待測标本濃度。

　　（三）結論：

　　該方法進行了精确性和穩定性實驗，方法比較穩定可靠。并對114名DM患者的尿銅藍蛋白含量及尿微量白蛋白含量進行相關分析，兩者呈正相關，且在尿微量白蛋白陰性的糖尿病病人中，仍有49、5%的病人尿銅藍蛋白陽性。因此，尿銅藍蛋白質檢測很有可能成爲DN早期的較第三診斷指标。

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　　三、尿白蛋白片段的檢測

　　（一）方法：免疫印迹法。

　　（二）實驗步驟：

　　1、尿樣與樣品處理液等量混合，置沸水浴3分鍾。2、聚丙烯酰胺凝膠電泳，每孔加樣20μι，電壓200V。3、将膠上的蛋白帶轉印到硝基纖維素膜上，轉印電流340mA，2小時後取出，封閉1小時。4、加入白蛋白抗體和酶标白蛋白，冰箱過夜。5、加入顯色液，出現蛋白帶爲陽性，未見蛋白帶爲陰性。

　　（三）結論：

　　通過實驗得出凡是尿白蛋白陽性者，尿白蛋白片段也爲陽性，而尿白蛋白陰性者中，仍有30%爲尿白蛋白片段陽性。曾有人對後者進行随訪觀察，發現他們中有18%發展爲尿白蛋白，蛋白陽性。因此，認爲尿白蛋白片段具有更高的特異性和早期栓出率，能更早地發現DN患者。

　　綜上所述，除尿微量白蛋白檢測是目前人們較爲公認的DN早期診斷指标外，其它兩種都還在觀察及研究中。目前國内外還沒有建立尿銅藍蛋白酶聯免疫測定方法，市場上買不到試劑盒，其作用機理還待于進一步深入研究。免疫印迹法分析尿白蛋白片段，在我院已應用于臨床，對尿白蛋白陰性者，再用本法檢測分析，可以更有效地避免早期糖尿病腎病的漏診，是預測腎髒病變的更爲早期，更爲靈敏的指标。